Ako určiť optimálnu koncentráciu?
Pre induktor IPTG (izopropyl-beta-d-tiogalaktozid) platí, že čím vyššia je koncentrácia, tým lepšie.Optimálna koncentrácia závisí od konkrétnych experimentálnych podmienok a požadovaného indukčného účinku.
Vo všeobecnosti sa koncentrácia IPTG používa v rozsahu 0,1 až 1 mM.Nižšie koncentrácie môžu znížiť nepriaznivé účinky na rast buniek a môžu znížiť cytotoxicitu v dôsledku nadmernej expresie cieľových proteínov.Vyššie koncentrácie môžu spôsobiť nadmernú metabolickú záťaž buniek, čo ovplyvňuje rast buniek a účinnosť expresie.
Spôsob, ako určiť optimálnu koncentráciu, môže byť vyhodnotenie úrovne expresie cieľového proteínu vykonaním IPTG indukčných testov pri rôznych koncentráciách.Kultivačné testy v malom meradle je možné vykonať s použitím radu koncentrácií IPTG (napr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM atď.) a účinok expresie pri rôznych koncentráciách možno vyhodnotiť detekciou úrovne expresie cieľového proteínu (napr. Western blot alebo fluorescenčná detekcia).Podľa experimentálnych výsledkov bola ako optimálna koncentrácia vybraná koncentrácia s najlepším účinkom na expresiu.
Okrem toho môžete tiež použiť príslušnú literatúru alebo skúsenosti iných laboratórií, aby ste pochopili bežne používaný rozsah koncentrácií IPTG za podobných experimentálnych podmienok a potom optimalizovali a upravili podľa experimentálnych potrieb.
Je dôležité poznamenať, že optimálna koncentrácia sa môže líšiť v závislosti od rôznych expresných systémov, cieľových proteínov a experimentálnych podmienok, takže je najlepšie optimalizovať prípad od prípadu.
Čas odoslania: 28. septembra 2023