4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranozid CAS:200422-18-0

Účinok: ONPG je substrát špecificky používaný na detekciu prítomnosti a aktivity enzýmu β-galaktozidázy.Keď je enzým β-galaktozidáza prítomný a aktívny, štiepi ONPG na dva produkty: o-nitrofenol a derivát galaktózy.Uvoľnenie o-nitrofenolu má za následok zmenu žltej farby, ktorá sa môže merať pomocou spektrofotometra.

Aplikácia: ONPG má niekoľko aplikácií vo výskume molekulárnej biológie a biochémie:

Stanovenie aktivity β-galaktozidázy: ONPG sa bežne používa na meranie a kvantifikáciu aktivity enzýmu β-galaktozidázy.Rýchlosť tvorby o-nitrofenolu, ktorá je priamo úmerná aktivite enzýmu, sa môže merať spektrofotometricky.

Génová expresia a regulácia: ONPG sa často používa v experimentoch súvisiacich so štúdiami génovej expresie a regulácie.Často sa používa v testoch fúznych proteínov, ako je bežne používaný fúzny systém lacZ, na štúdium expresie génov pod kontrolou špecifických promótorov.Aktivita beta-galaktozidázy meraná pomocou ONPG poskytuje pohľad na úroveň génovej expresie.

Skríning aktivity β-galaktozidázy: ONPG sa môže použiť ako kolorimetrická metóda skríningu v technológii rekombinantnej DNA na identifikáciu prítomnosti a funkčnosti génu LacZ, ktorý kóduje β-galaktozidázu.Táto metóda skríningu pomáha pri identifikácii klonov, ktoré obsahujú požadovaný gén.

Štúdie kinetiky enzýmov: ONPG je tiež užitočný pri štúdiu kinetiky enzýmu β-galaktozidázy.Meraním rýchlosti reakcie enzým-substrát pri rôznych koncentráciách substrátu je možné určiť kinetické parametre, ako sú Michaelis-Mentenove konštanty (Km) a maximálne reakčné rýchlosti (Vmax).