4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranozid CAS: 200422-18-0

Účinok: ONPG je substrát špecificky používaný na detekciu prítomnosti a aktivity enzýmu β-galaktozidáza. Keď je enzým β-galaktozidáza prítomný a aktívny, štiepi ONPG na dva produkty: o-nitrofenol a derivát galaktózy. Uvoľnenie o-nitrofenolu vedie k žltej zmene farby, ktorú je možné merať spektrofotometrom.

Použitie: ONPG má niekoľko aplikácií v molekulárnej biológii a biochemickom výskume:

Stanovenie aktivity β-galaktozidázy: ONPG sa bežne používa na meranie a kvantifikáciu aktivity enzýmu β-galaktozidázy. Rýchlosť tvorby o-nitrofenolu, ktorá je priamo úmerná aktivite enzýmu, sa dá merať spektrofotometricky.

Génová expresia a regulácia: ONPG sa často používa v experimentoch súvisiacich so štúdiami génovej expresie a regulácie. Často sa používa v testoch fúznych proteínov, ako je bežne používaný fúzny systém lacZ, na štúdium expresie génov pod kontrolou špecifických promótorov. Aktivita beta-galaktozidázy meraná pomocou ONPG poskytuje prehľad o úrovni génovej expresie.

Skríning aktivity β-galaktozidázy: ONPG sa môže použiť ako kolorimetrická skríningová metóda v technológii rekombinantnej DNA na identifikáciu prítomnosti a funkčnosti génu LacZ, ktorý kóduje β-galaktozidázu. Táto skríningová metóda pomáha pri identifikácii klonov, ktoré obsahujú sledovaný gén.

Štúdie kinetiky enzýmov: ONPG je tiež užitočný pri štúdiu kinetiky enzýmu β-galaktozidázy. Meraním rýchlosti reakcie enzým-substrát pri rôznych koncentráciách substrátu je možné určiť kinetické parametre, ako sú Michaelisove-Mentenove konštanty (Km) a maximálne reakčné rýchlosti (Vmax).