Ditiotreitol (DTT) je bežne používané redukčné činidlo, známe tiež ako nová zelená prísada.Je to malá molekulová organická zlúčenina s dvoma merkaptánovými skupinami (-SH).Vďaka svojim redukčným vlastnostiam a stabilite sa DTT široko používa v biochémii a experimentoch molekulárnej biológie.
Hlavnou úlohou DTT je redukcia disulfidových väzieb v proteínoch a iných biomolekulách.Disulfidová väzba je dôležitou súčasťou skladania a stability proteínu, ale za určitých experimentálnych podmienok, ako je redukovateľná SDS-PAGE analýza, rekombinácia a skladanie proteínov, je potrebné redukovať disulfidovú väzbu na dve tiolové skupiny, aby sa odhalila priestorová štruktúra proteín.DTT môže reagovať s disulfidovými väzbami, aby ich redukoval na merkaptánové skupiny, čím sa otvára priestorová štruktúra proteínu a uľahčuje sa analýza a manipulácia.
DTT možno použiť aj na ochranu aktivity a stability enzýmu.V niektorých reakciách katalyzovaných enzýmom môže byť aktivita enzýmu znížená oxidantom.DTT môže reagovať s oxidantmi a redukovať ich na neškodné látky, čím chráni aktivitu a stabilitu enzýmu.
V porovnaní s tradičnými redukčnými činidlami, ako je β-merkaptoetanol (β-ME), sa DTT považuje za bezpečnejšie a stabilnejšie redukčné činidlo.Je nielen stabilný vo vodnom roztoku, ale zachováva si svoje redukčné vlastnosti aj pri vysokej teplote a acidobázických podmienkach.
Použitie DTT je pomerne jednoduché.Vo všeobecnosti sa DTT rozpustí vo vhodnom pufri a potom sa pridá do experimentálneho systému.Optimálna koncentrácia DTT sa musí určiť podľa špecifického experimentu a všeobecne sa používa v rozsahu 0,1 až 1 mM.Nižšie koncentrácie môžu znížiť nepriaznivé účinky na rast buniek a môžu znížiť cytotoxicitu v dôsledku nadmernej expresie cieľových proteínov.Vyššie koncentrácie môžu spôsobiť nadmernú metabolickú záťaž buniek, čo ovplyvňuje rast buniek a účinnosť expresie.
Spôsob, ako určiť optimálnu koncentráciu, môže byť vyhodnotenie úrovne expresie cieľového proteínu vykonaním IPTG indukčných testov pri rôznych koncentráciách.Kultivačné testy v malom meradle je možné vykonať s použitím radu koncentrácií IPTG (napr. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM atď.) a účinok expresie pri rôznych koncentráciách možno vyhodnotiť detekciou úrovne expresie cieľového proteínu (napr. Western blot alebo fluorescenčná detekcia).Podľa experimentálnych výsledkov bola ako optimálna koncentrácia vybraná koncentrácia s najlepším účinkom na expresiu.
Okrem toho môžete tiež použiť príslušnú literatúru alebo skúsenosti iných laboratórií, aby ste pochopili bežne používaný rozsah koncentrácií IPTG za podobných experimentálnych podmienok a potom optimalizovali a upravili podľa experimentálnych potrieb.
Je dôležité poznamenať, že optimálna koncentrácia sa môže líšiť v závislosti od rôznych expresných systémov, cieľových proteínov a experimentálnych podmienok, takže je najlepšie optimalizovať prípad od prípadu.
Stručne povedané, DTT je bežne používané redukčné činidlo, ktoré možno použiť na redukciu disulfidových väzieb v proteínoch a iných biomolekulách a na ochranu aktivity a stability enzýmu.Široko sa používa v biochémii a experimentoch molekulárnej biológie.
Čas odoslania: 28. septembra 2023